2026年 07期
茱萸丸通过抑制肠道菌群产生氧化三甲胺改善金黄地鼠皮脂溢出作用与机制研究
宋玮;张钟艺;滕政闻;党思捷;沈涛;肖敏;张永;目的:观察茱萸丸对雄激素诱导的金黄地鼠皮脂溢出的影响及其相关机制。方法:采用双氢睾酮诱导金黄地鼠耳廓组织建立皮脂溢出动物模型，总造模周期为18 d。造模成功的50只金黄地鼠随机分为模型对照组、茱萸丸106、212、425 mg/kg及异维A酸3.7 mg/kg组，每组10只，另设正常对照组10只。造模后各组灌胃给予相应药物或无菌蒸馏水，连续4 w。评价耳廓形态学与HE病理改变；生化法检测耳廓组织游离脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)含量；ELISA法检测血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)含量；16S rDNA技术检测金黄地鼠粪便的肠道菌群Alpha、Beta多样性及物种组成差异；UHPLC-MS/MS检测金黄地鼠血浆中氧化三甲胺(TMAO)、三甲胺(TMA)含量；Pearson检验分析肠道菌群与TMAO、TMA的相关性；免疫组化法检测金黄地鼠耳廓组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3 (NLRP3)、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1 (Caspase-1)蛋白表达水平；Western blot及Real-time PCR法检测耳廓组织髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)蛋白及mRNA表达。结果:与正常对照组相比，模型对照组耳廓皮肤增厚、角化过度，血清T、LH含量升高，E2含量降低，肠道菌群Alpha多样性下降，厚壁菌门、杜氏牙形石属丰度升高，拟杆菌门、放线菌门、圣埃里立支杆菌属、粪杆菌属、布劳特氏菌属丰度降低，血浆TMAO、TMA、NLRP3炎性小体相关蛋白以及MyD88/IRAK1/TRAF6/NF-κB通路基因和蛋白表达上调(P<0.01);与模型对照组比较，茱萸丸各剂量组耳廓病变改善，血清T、LH含量降低、E2含量升高，肠道菌群Alpha多样性升高，疣微菌门、拟杆菌门、圣埃里立支杆菌属、布劳特氏菌属、嗜黏蛋白阿克曼菌属丰度升高，厚壁菌门、杜氏牙形石属丰度降低，血浆TMAO、TMA含量降低，NLRP3炎性小体及MyD88/IRAK1/TRAF6/NF-κB通路蛋白与mRNA表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论:茱萸丸能够调控性激素水平，抑制皮脂溢出的病理改变，其机制可能与纠正菌群紊乱，减少TMAO、TMA生成，调控MyD88/IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路及其下游NLRP3炎性小体的表达有关。
五子衍宗丸通过调控泛素-蛋白酶体系统抑制反式维甲酸诱导的PC12细胞凋亡
茹意;李瑞雪;谢良骐;徐磊;贾璐;秦劭晨;王青;马存根;樊慧杰;柴智;目的:研究五子衍宗丸对全反式维甲酸(atRA)诱导的神经细胞凋亡途径与泛素-蛋白酶体系统(UPS)的关系。方法:将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)随机分为空白对照组、模型对照组、五子衍宗丸125μg/mL组、MG132蛋白酶体抑制剂组。采用atRA诱导PC12细胞凋亡模型；采用CCK-8法测定细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；高通量RNA-seq测序技术对细胞总RNA测序，筛选差异表达基因，运用趋势分析找出目的趋势模块，对目的趋势模块进行GO富集分析和KEGG通路富集分析，筛选凋亡和泛素相关基因。再次以atRA诱导PC12细胞凋亡模型，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测凋亡基因细胞周期检测点激酶2(Chek2)、极光激酶B(Aurkb)、半胱天冬酶4(Caspase4)和泛素相关基因Polo-like激酶(Pik1)、泛素结合酶E2C(Ube2C)、同源蛋白3(Trib3)mRNA的表达。结果:五子衍宗丸细胞活力显著增加(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01);目的趋势模块GO富集分析和KEGG分析中，五子衍宗丸＿下调＿上调与MG132＿下调、五子衍宗丸＿上调＿下调与MG132＿上调显著富集的GO条目和KEGG通路有多数重合，筛选出的凋亡和泛素相关基因在PPI和共表达网络分析中连接度较高，且两个分析结果中共有的基因有Chek2、Aurkb、Caspase4等凋亡相关基因，Pik1、Ube2c、Trib3等泛素相关基因。既包含这些基因中的凋亡相关基因又包含这些基因中的泛素相关基因的KEGG通路有细胞周期，流体剪切力与动脉粥样硬化等通路；RT-qPCR结果显示，五子衍宗丸125μg/mL组凋亡相关基因、Trib3、Chek2、Aurkb mRNA的表达下调(P<0.05或P<0.01);MG132组凋亡相关基因、Trib3、Chek2、Aurkb mRNA的表达上调(P<0.05);MG132+五子衍宗丸组对于凋亡相关基因和UPS相关基因表达的影响与MG132组的趋势相反(P<0.05)。结论:五子衍宗丸能够抑制atRA诱导的PC12细胞凋亡，对神经元样细胞具有一定的保护作用。其机制与泛素有一定的关系，可能是通过调控Chek2、Aurkb、Birc5、Pik1、Ube2c、Aurka、Caspase4 mRNA的表达实现。
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益肾健脾化瘀汤对糖尿病大鼠肝脏氧化应激、凋亡和纤维化的影响及机制
杨世瑜;高思齐;肖雨;何继江;邱昌龙;李继安;储金秀;目的:本研究旨在探讨益肾健脾化瘀汤对糖尿病大鼠肝损伤的影响及机制。方法:通过高脂饲料喂养结合单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg建立糖尿病大鼠模型，将造模成功的糖尿病大鼠随机分为模型对照组、益肾健脾化瘀汤16.8、33.6 g/kg组、阳性对照药卡格列净9 mg/kg组，药物连续干预8 w。以普通维持饲料喂养的正常大鼠为正常对照组。生化法检测血糖、血脂、肝功能、氧化应激、炎症因子相关指标；化学发光法检测肝纤四项；计算肝指数；HE染色、糖原染色、马松染色和透射电子显微镜观察肝脏病理变化；原位末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡；免疫组织化学染色法检测肝组织胶原沉积情况；蛋白质免疫印记法检测肝组织kelch样ECH关联蛋白1/核因子-E2相关因子2/血红素加氧酶(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路相关蛋白、凋亡相关蛋白和转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量显著降低，血糖、血脂和肝脏指数明显升高(P<0.05或P<0.01),大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力明显升高(P<0.05或P<0.01),肝组织呈现脂肪变性及纤维化改变，血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)含量显著降低(P<0.05或P<0.01),丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、IV型胶原(CIV)和III型前胶原(PCIII)含量明显升高(P<0.05或P<0.01),大鼠肝组织TUNEL染色阳性区域面积显著增加(P<0.01),肝组织Keap1蛋白表达明显上调(P<0.05),Nrf2和下游HO-1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)和B细胞淋巴瘤基因2(Bcl2)蛋白表达显著下调(P<0.05),Bcl2关联X蛋白质(BAX)的表达明显上调(P<0.05),肝组织纤维化相关因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤连蛋白和1型胶原蛋白表达显著上调(P<0.01),TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达显著上调；与模型对照组比较，益肾健脾化瘀汤各组大鼠的体质量升高，血糖、血脂和肝脏指数降低(P<0.05或P<0.01),血清中ALT、AST活力降低(P<0.05或P<0.01)、肝组织病理损伤减轻，血清中SOD活力、GSH-PX和CAT含量升高(P<0.01),MDA、TNF-α、IL-1β、HA、LN、CIV和PCIII含量降低，肝组织TUNEL染色阳性区域面积降低(P<0.05或P<0.01),肝组织Keap1蛋白表达下调(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达上调(P<0.01),Caspase3和BCL2蛋白表达上调(P<0.05),BAX蛋白表达下调(P<0.05),α-SMA、TGF-β1、纤连蛋白和1型胶原蛋白阳性表达水平降低(P<0.05或P<0.01),TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白的表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论:益肾健脾化瘀汤可以减轻糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱和肝损伤，其机制可能与抑制氧化应激、细胞凋亡和纤维化信号通路有关。
基于PI3K/AKT/HIF-1α通路探讨泄浊解毒方调控糖酵解改善肠黏膜屏障治疗溃疡性结肠炎的机制研究
揣强;任士杰;蒋晓红;刘欣;郎晓猛;郭佳;刘建平;赵源;目的:通过生物信息学、机器学习及动物实验探究泄浊解毒方调控糖酵解改善肠黏膜屏障治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:通过基因综合表达数据库(GEO)提取UC基因芯片，并获得差异基因(DEGs),通过Genecards数据库提取糖酵解(Glycolysis)基因集，通过韦恩图获取交集基因(Gly-DEGs),通过Metascape数据库进行GO和KEGG富集分析，通过支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、受试者工作特征(ROC)机器学习筛选具备诊断及治疗潜能的核心Gly-DEGs,通过反卷积法(CIBERSORT)进行免疫浸润分析。以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-无水乙醇诱导UC大鼠模型，取大鼠血液及结肠组织作为标本，苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠结肠病理学形态；ELISA法检测大鼠血清促炎因子白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10含量；免疫组化法检测大鼠结肠磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)、血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM1)、基质金属蛋白酶-1(MMP1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、己糖激酶2(HK2)蛋白阳性表达水平；免疫荧光(IF)法检测大鼠结肠组织闭合蛋白(Occludin)、粘蛋白2(MUC2)、连接黏附分子A(JAM-A)表达水平；Real-time PCR法检测大鼠结肠组织Pck1、Pecam1、Mmp1、Ldha、Hk2 mRNA表达；Western blot法检测大鼠结肠组织PCK1、PECAM1、MMP1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、HIF-1α蛋白表达。结果:通过GEO数据库检索到GSE206285、GSE87466数据集，分别获得1 510、957个差异基因，通过Genecards数据库得到4 682个糖酵解基因，通过交集得到144个Gly-DEGs, KEGG结果表明，Gly-DEGs主要富集于IL-17、PI3K-AKT、PPAR、HIF-1等信号通路，通过SVM、RF、ROC模型，最终得到3个核心Gly-DEGs(PCK1、PECAM1、MMP1)。免疫浸润分析结果表明，记忆B细胞、浆细胞、CD8~+T细胞、自然杀伤细胞、M0、M1型巨噬细胞、肥大细胞等存在显著差异(P<0.01),核心Gly-DEGs的表达与T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等存在显著相关性，核心Gly-DEGs与肠黏膜屏障相关性分析结果表明，核心Gly-DEGs与OCLN(Occludin)、MUC2、F11R(JAM-A)存在显著的相关性(P<0.05)。动物实验结果表明：与正常对照组比较，模型对照组结肠黏膜出现明显的病理改变，黏膜上皮完整性被破坏，溃疡形成，腺体结构紊乱、减少甚至消失，黏膜层及固有层见炎症细胞浸润，血清炎症因子IL-1β、TNF-α含量显著升高，IL-10含量显著降低(P<0.01),结肠组织MMP1、PECAM1、LDHA、HK2阳性表达面积显著增加，蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01),Occludin、MUC2、JAM-A免疫荧光强度显著降低(P<0.01),PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、HIF-1α蛋白表达显著上调(P<0.01),PCK1呈阴性或弱阳性表达，蛋白及mRNA显著下调(P<0.01);与模型对照组比较，泄浊解毒方6.7、13.3、26.6 g/kg组可见结肠组织大部分上皮结构基本完整，腺体排列基本规则，仅有少量炎症细胞浸润，血清IL-1β、TNF-α含量显著降低，IL-10含量显著增加(P<0.01),结肠组织MMP1、PECAM1、LDHA、HK2阳性表达面积显著降低、蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01),Occludin、MUC2、JAM-A免疫荧光强度显著增加(P<0.01),PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、HIF-1α蛋白表达显著下调(P<0.01),PCK1呈阳性表达，表达水平显著增加，蛋白及mRNA显著上调(P<0.01)。结论:PCK1、PECAM1、MMP1是具有诊断及治疗潜能的核心Gly-DEGs标志物，介导T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等多种免疫细胞及肠上皮细胞代谢途径，泄浊解毒方可通过靶向PI3K-AKT-HIF-1α-糖酵解-肠黏膜屏障轴治疗UC。
复方柏芪丸调控PI3K/AKT/FOXO1通路改善代谢综合征大鼠糖脂代谢紊乱的作用机制研究
李格宁;文莉;郭容利;高欢晴;张宁;董楚星;李瑶;王四旺;欧莉;张萌萌;目的:结合体内药效学实验与网络药理学方法，探讨复方柏芪丸改善代谢综合征(metabolic syndrome, MS)大鼠糖脂代谢紊乱的作用机制。方法:采用网络药理学方法预测复方柏芪丸干预糖脂代谢紊乱的潜在作用靶点及信号通路。采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射构建以糖脂代谢紊乱为主要特征的MS大鼠模型，造模成功的大鼠随机分为模型对照组、复方柏芪丸0.6、1.3、2.5 g/kg组、血脂康0.1 g/kg组和二甲双胍0.2 g/kg组。连续给药6 w后，测定大鼠空腹血糖(FBG)变化；检测血清中的胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量；检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量；采用HE染色法检测胰腺和肝组织病理变化；油红O染色检测肝脏脂滴；通过RT-qPCR法和免疫组化染色法验证肝组织关键信号通路基因和蛋白表达。结果:网络药理学分析得出复方柏芪丸改善糖脂代谢紊乱涉及75种有效成分，作用于200个潜在靶点。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析表明其主要涉及磷脂酰激醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和糖尿病并发症晚期糖基化终产物(AGE)及其受体(RAGE)信号通路。动物实验结果显示，复方柏芪丸可以降低糖脂代谢紊乱大鼠的FBG,改善糖耐量和胰岛素抵抗，减轻血脂异常、肝功能损伤、肝脏脂质沉积及氧化应激状态；机制验证显示，其可上调肝组织Pi3k、Akt mRNA,下调叉头框蛋白O1(Foxo1)的mRNA表达，增加肝组织p-PI3K、p-AKT及p-FOXO1阳性表达面积。结论:复方柏芪丸可改善高糖高脂饲料联合STZ诱导的MS大鼠糖脂代谢异常状态，其作用机制可能与上调PI3K/AKT信号、促进FOXO1磷酸化失活、减轻肝脏氧化应激和炎症损伤有关。
桂杏水提取物调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用
孟慧心;张红;洪杨;杨薇;罗亚;张磊;周静;目的:观察桂杏水提取物对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤的改善作用及其机制。方法:采用气管滴注LPS 20 mg/kg建立C57BL/6J小鼠急性肺损伤模型，灌胃给予不同剂量桂杏水提取物。通过HE染色评估肺组织病理变化；ELISA法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-1β、IL-10含量；全自动血液分析仪计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中有核细胞数、白细胞数及分型细胞数；比色法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活力与丙二醛(MDA)含量；免疫组化法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)、F4/80、Toll样受体4(TLR4)蛋白阳性表达；逆转录聚合酶链式反应检测肺组织Il6、Ikba、Tnfa、C-X-C趋化因子配体1(Cxcl1)、肝细胞核因子4α(Hnf4a)、Snail转录因子与E盒结合锌指蛋白1(Zeb1)mRNA表达；蛋白免疫印迹法检测肺组织核内p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、TLR4、闭锁小环蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)及其磷酸化蛋白(p-IκBα)的表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组小鼠肺组织损伤评分显著升高(P<0.01),BALF中有核细胞总数、白细胞数与单核淋巴细胞数量明显升高(P<0.05或P<0.01),肺组织中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-10含量显著减少(P<0.01),血清MDA含量显著升高，SOD活力显著降低(P<0.01),肺组织NF-κB p65、F4/80、TLR4蛋白阳性表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);核内p65、p-NF-κB p65、TLR4、p-IκBα和MyD88的蛋白表达明显上调，IκBα、ZO-1和Occludin的表达明显下调(P<0.05或P<0.01);肺组织Cxcl1、Hnf4a、Il6、Snail、Tnfa与Zeb1的mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01),Ikba的mRNA表达明显下调(P<0.05);与模型对照组相比，桂杏水提取物3、14 g/kg组小鼠肺组织损伤评分明显降低(P<0.05),7、14 g/kg组支气管肺泡灌洗液(BALF)中有核细胞总数、白细胞数与中性粒细胞明显减少(P<0.05或P<0.01),3 g/kg组单核淋巴细胞显著减少(P<0.01),各剂量组肺组织IL-6、IL-1β含量明显降低，IL-10含量明显升高(P<0.05或P<0.01),14 g/kg组TNF-α含量明显降低(P<0.05),3 g/kg组血清MDA含量降低(P<0.05),各剂量组SOD活力显著增强(P<0.01),肺组织TLR4阳性表达水平显著降低(P<0.01),7、14 g/kg组肺组织NF-κB p65及F4/80阳性表达水平明显降低(P<0.05),14 g/kg组肺组织核内p65、p-NF-κB p65、MyD88、TLR4及p-IκBα蛋白表达下调，IκBα、ZO-1、Occludin蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),Il6、Tnfa、Cxcl1、Snail、Zeb1 mRNA表达显著下调，Hnf4a、Ikba mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论:桂杏水提取物可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，减轻炎症反应、氧化应激与上皮屏障破坏，从而对LPS诱导的急性肺损伤发挥保护作用。
解毒化瘀颗粒含药肠道内容物调控PI3K/AKT信号通路促进大鼠肝上皮样干细胞增殖分化
陈研焰;蓝艳梅;王明刚;张荣臻;毛德文;目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路研究解毒化瘀颗粒调节肠道微生态对肝干细胞再生的影响及机制。方法:构建急性肝衰竭大鼠模型，设置正常对照组、模型对照组、解毒化瘀颗粒57.6 g/kg组，干预48 h后收集各大鼠肠道内容物悬液并制备肠道内容物总蛋白(IBRP),用于后续干预肝干细胞。体外培养WB-F344细胞，分为正常对照组、模型对照组、解毒化瘀颗粒0.1、0.2、0.4 mg/mL含药IBRP组。采用CCK-8法检测不同干预时间下的细胞存活率；倒置生物显微镜下观察肝干细胞形态结构；免疫荧光染色检测白蛋白(ALB);细胞角蛋白19(CK19)蛋白荧光表达水平；RT-qPCR法检测Alb、Ck19的mRNA表达；Western blot法检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达。结果:与正常对照组相比，模型对照组肝干细胞形态明显皱缩，排列紊乱，细胞存活率显著降低(P<0.01),ALB、CK19蛋白荧光表达水平降低，Alb、Ck19 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01);与模型对照组相比，解毒化瘀颗粒0.1、0.2、0.4 mg/mL含药IBRP组的肝干细胞形态更加规整，细胞存活率显著升高(P<0.01),ALB、CK19蛋白荧光表达水平升高，Alb mRNA表达显著上调(P<0.01),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:经解毒化瘀颗粒干预后的肠道微生态可以明显促进肝干细胞的增殖分化，并显示出定向转化为成熟肝细胞的趋势，其机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。
芪黄健脾滋肾颗粒调控补体C1q影响巨噬细胞极化缓解系统性红斑狼疮小鼠肾损伤
庞利君;李云飞;束龙武;李明;黄传兵;目的:基于补体1q(C1q)探讨芪黄健脾滋肾颗粒对系统性红斑狼疮小鼠(MRL/lpr)肾脏巨噬细胞极化的影响。方法:将MRL/lpr小鼠随机分为模型对照组、芪黄健脾滋肾颗粒3.9 g/kg组、醋酸泼尼松3 mg/kg组、补体C1q抑制剂40 U/kg组，每组6只，正常对照组为C57BL/6小鼠。每日固定时间灌胃给药，连续8 w。采用HE染色、PAS染色、Masson染色观察肾组织病理，计算胶原容积分数(CVF);采用试剂盒检测血清肌酐(Crea)、尿素氮(BUN)、尿蛋白(PRO)含量；ELISA法检测小鼠血清抗双链DNA(dsDNA)抗体，以及肾组织匀浆中C1q、白细胞介素(IL)-10、转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6含量；RT-qPCR法、Western Blot法检测肾组织中精氨酸酶1(Arg1)、Il10、Il6、一氧化氮合酶(Inos)的mRNA及蛋白的表达；流式细胞术检测肾组织中CD86+ M1和CD206+ M2型细胞比例；免疫荧光双标法检测F4/80+ iNOS M1型巨噬细胞、F4/80+ Arg1 M2型巨噬细胞的表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组可见肾小球基底膜增厚、部分可见肾间质水肿及炎症细胞浸润等病理现象，肾组织CVF、尿PRO含量、血清Crea、BUN含量、抗dsDNA抗体、肾组织TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.01),肾组织C1q、TGF-β1、IL-10含量显著降低(P<0.01),肾组织Il6、Inos的mRNA、蛋白表达显著上调，Arg1、Il10的mRNA、蛋白表达下调(P<0.01),M1型巨噬细胞百分率显著升高，M2型巨噬细胞百分率显著降低(P<0.01),M1/M2型巨噬细胞比例显著升高(P<0.01);与模型对照组比较，芪黄健脾滋肾颗粒3.9 g/kg组肾脏病理改善，肾小球结构、肾小管排列恢复正常，CVF、PRO、Crea、BUN、抗dsDNA抗体、TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.01),肾组织C1q、TGFβ1、IL-10含量明显升高(P<0.05),肾组织Il6、Inos的mRNA、蛋白表达显著下调(P<0.01),Arg1、Il10的mRNA、蛋白表达显著上调(P<0.01),M1型巨噬细胞百分率显著降低，M2型巨噬细胞百分率显著升高(P<0.01),M1/M2型巨噬细胞比例显著降低(P<0.01)。结论:芪黄健脾滋肾颗粒对MRL/lpr小鼠的肾脏有明显的保护作用，其机制可能与C1q调控巨噬细胞极化表型有关。
丹参酮ⅡA调节钙蛋白酶-1减轻心肌缺血再灌注损伤
李洋;鲁美丽;王洪新;贺欣;目的:从钙蛋白酶-1(Calpain-1)角度探讨丹参酮ⅡA减轻心肌缺血再灌注损伤的作用和机制。方法:体内实验采用左冠状动脉结扎法诱导大鼠心肌缺血再灌注损伤。SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、丹参酮ⅡA 5、10、20 mg/kg组和钙蛋白酶抑制剂Ⅲ(MDL-28170)10 mg/kg阳性对照组。体外实验采用缺氧复氧法诱导H9c2心肌细胞损伤。采用NBT染色检测心肌梗死面积；超声心动图评价心脏功能；TUNEL法测定心肌组织细胞凋亡；DHE染色测定组织和细胞活性氧(ROS)水平；试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和细胞Calpain-1活性；JC-1染色法测定线粒体膜电位(MMP)水平；Western blot法测定Calpain-1和肌/内质浆网钙泵(SERCA2a)蛋白表达；Fluo-3/AM测定心肌细胞Ca2+水平。分子对接预测丹参酮ⅡA与Calpain-1结合活性。结果:与假手术对照组相比，模型对照组大鼠心肌梗死面积增加，心脏LVEF和LVFS降低，LVEDD和LVESD增加，血清LDH、CK-MB活力增加，心肌细胞凋亡率增加，ROS水平和MDA含量增加，SOD活力降低，心肌组织Calpain-1蛋白表达上调，SERCA 2a蛋白表达下调(P<0.01);与模型对照组相比，丹参酮ⅡA 20 mg/kg和MDL-28170 10 mg/kg组心脏LVEF和LVFS增加，LVEDD和LVESD降低，血清LDH、CK-MB活力减少，细胞凋亡率降低，ROS水平和MDA含量降低，SOD活力增加，心肌组织Calpain-1蛋白表达下调，SERCA2a蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01)。体外实验结果在氧化应激、凋亡、Calpain-1和SERCA2a蛋白表达方面与体内结果一致。体外实验结果显示，与空白对照组相比，模型对照组心肌细胞Calpain-1活力增加，Ca2+水平明显增加(P<0.01);与模型对照组相比，丹参酮ⅡA 20、40μmol/L组和MDL-28170组Calpain-1活力降低、蛋白表达上调，Ca2+水平降低(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果显示，丹参酮ⅡA与Calpain-1具有很好的结合活性。结论:丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与下调Calpain-1表达，上调SERCA2a表达，进而抑制心肌细胞凋亡，氧化应激和Ca2+超载有关。
基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨金铁锁三萜对类风湿性关节炎的作用机制
顾一凡;黄国东;李雨珊;苏炎林;吴承渝;丁闻楚;吴佳蕙;李晶晶;秦嵩雯;目的:本研究旨在探讨金铁锁三萜对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用和机制。方法:运用网络药理学筛选金铁锁三萜对RA的关键靶点和信号通路,将活性成分与关键靶点进行分子对接。建立胶原诱导的RA模型,通过AI评分、足肿胀率、ELISA、HE、番红固绿、TRAP染色、免疫组化和Western blot法等验证其作用和机制。结果:通过网络药理学,获得棉根皂苷元、表棉根皂苷元等7个金铁锁三萜活性成分、149个药物-疾病共同靶点,核心靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、蛋白激酶B(AKT1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等,GO富集分析涉及生物过程498个条目、细胞组分88个条目和分子功能133个条目;KEGG分析涉及153条信号通路,前5条为内分泌抵抗、糖尿病并发症中糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)通路、结合免疫球蛋白E(IgE)的Fc受体(Fc epsilon R)通路、癌症中的蛋白聚糖和催乳素信号通路;分子对接显示,金铁锁三萜活性成分与核心靶点具有较好的结合活性;动物实验结果显示,较模型对照组,金铁锁三萜76、151、303 mg/kg组关节指数(AI)和足肿胀率显著降低(P<0.01),血清RF降低(P<0.05),踝关节软骨组织TNF-α、白介素-6(IL-6)含量降低(P<0.05),HE、番红固绿、TRAP染色显示,踝关节病理状态有所改善,踝关节软骨丝裂原活化蛋白激酶1、3、8、9、14(MAPK1、MAPK3、MAPK8、MAPK9、MAPK14)、核转录因子P65(NF-κB P65)磷酸化蛋白表达及转录激活蛋白-1(AP-1)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)的蛋白表达下调,细胞凋亡调节因子(BAX)和半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Caspase-3)的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:金铁锁三萜通过抑制类风湿因子及促炎细胞因子分泌,抑制关键磷酸化事件和调节凋亡因子,从而减轻CIA小鼠的踝关节软骨炎症,发挥治疗RA的作用。