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基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响
毕晓英;许珂;赵艳晓;郑瑞君;目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组，其余建立PCOS大鼠模型，40只大鼠建模成功，随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组，各组灌胃生理盐水或相应药物，连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平；HE染色观察卵巢病理学变化；流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率；Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高，FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低，LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较，抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高，FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低，LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低，FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高，LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白，黄体减少，出现多个囊状扩张卵泡；杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小，表面色泽较红，黄体有所增加，囊状扩张卵泡减少；抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少，囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平，改善其性激素水平。
补阳还五汤治疗多发性硬化的网络药理学研究及其单体的实验验证
刘健;陈莹;梁亚杰;李彦青;肖莹;王翰斌;毛珍;马存根;王青;目的:基于网络药理学、分子对接技术和动物实验，探讨补阳还五汤治疗多发性硬化症(MS)的作用机制及其单体成分治疗效果的验证。方法:通过TCMSP、HERB数据库收集补阳还五汤的药物活性成分，通过口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18、血脑屏障透过性(BBB)≥-0.3为标准筛选有效药物活性成分；使用SwissADME和SwissTargetPrediction平台预测有效药物活性成分作用靶点，运用UniProt校正作用靶点基因名；利用GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库获取MS的相关疾病靶点。取有效药物活性成分作用靶点和MS的相关疾病靶点做交集靶点韦恩图；使用Cytoscape3.9.1软件构建“药物-活性成分-疾病靶点基因网络图”;通过Metascape数据库对交集靶点进行GO和KEGG通路富集分析，借助微生信平台将其可视化，分析得到JAK-STAT通路为补阳还五汤药物成分的关键作用通路，做“药物关键作用靶点-靶点通路图”,采用STRING11.5在线数据库和Cytoscape3.9.1软件构建蛋白质互作网络(PPI);结合PPI网络结果再用分子对接技术进行测试，发现小分子药物活性成分芒柄花黄素与受体蛋白能自发结合。使用双环己酮草酰二腙(Cuprizone, CPZ)诱导的髓鞘脱失模型验证活性成分芒柄花黄素是否抑制髓鞘脱失。将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组和芒柄花黄素30 mg/kg组，每组10只。正常对照组小鼠给予正常饲料，造模组喂养含0.2%CPZ饲料6 w,第5 w开始，给药组腹腔注射芒柄花黄素治疗2 w。采用高架十字迷宫试验、旷场试验评价其对小鼠行为学的影响；采用黑金染色、免疫荧光染色检测小鼠胼胝体区域髓鞘脱失情况和MBP、IBA1、GFAP蛋白表达的变化；采用ELISA法检测脑组织液TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量；微量酶标法检测LPO、GSH的含量。结果:共获得162个补阳还五汤治疗MS的关键靶点。KEGG富集得到三条和MS有关的通路为Janus激酶(JAK)/信号转导子和转录激活子(STAT)信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)信号通路，可能的主要作用通路为JAK-STAT,主要作用靶点为STAT3、STAT1、JAK2;使用分子对接技术最终筛选得到有效小分子药物单体为芒柄花黄素。动物实验证明芒柄花黄素改善CPZ模型狂躁和焦虑的行为学表现、抑制髓鞘脱失，降低CPZ模型脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、LPO含量，升高IL-10、GSH含量，促进小胶质细胞(MG)活化，抑制星形胶质细胞(AST)的活化。结论:本文通过网络药理学对补阳还五汤作用机制进行分析，通过分子对接预测有效单体芒柄花黄素，并首次用动物实验证明芒柄花黄素可显著改善CPZ模型的行为学、抑制髓鞘脱失，其治疗机制可能与其抑制CPZ模型的炎症反应和氧化应激、调控MG和AST的活化有关。
韭菜子化学成分、药理作用及质量标志物(Q-Marker)的预测分析
赵日虹;刘习平;周昭丽;陈娟;崔宇姿;丛悦;韭菜子为百合科植物韭菜(Allium tuberosum RottL.ex Spreng.)的干燥成熟种子，其主要含有脂肪酸、挥发油、皂苷类、核苷类、生物碱类、黄酮类、活性多肽、硫化物、等化学成分。现代药理学和临床研究表明韭菜子具有改善性功能、保护肝脏、提高机体免疫力、抗氧化、抗菌、等多种药理活性，可以治疗顽固性呃逆、蛀牙疼痛、阳痿遗精、遗尿尿频、腰膝酸痛、等。通过系统总结近几十年韭菜子的国内外研究文献，在对其化学成分及药理作用综述的基础上，结合质量标志物概念，从药用植物亲缘学及化学成分特有性、传统功效、传统药性、炮制相关、化学成分可测性等方面对韭菜子Q-Marker进行预测分析。建议对韭菜子的挥发油、甾体皂苷类成分进行系统深入分析，为韭菜子质量标准的制定及评价体系的建立提供科学依据。
淫羊藿素的抗肿瘤作用及机制研究进展
赖丽娟;谢佳丽;黄志华;淫羊藿素是淫羊藿的主要活性单体成分,近年来研究表明淫羊藿素具有抗肿瘤、抗肝纤维化、抑制骨质疏松和神经保护等药理作用,本文综述了淫羊藿素对乳腺癌的双重作用及其对前列腺癌、人骨肉瘤、膀胱癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌抑制作用,并分析了其抗肿瘤的作用机制主要是通过促进肿瘤细胞凋亡和坏死、干预肿瘤相关信号通路、调节靶基因的表达、诱导细胞周期停滞、抑制肿瘤血管生成及炎症信号等途径实现的。
甘草活性成分对顺铂致肝肾损害防治作用研究进展
张楠;闫潇;连小龙;张尚龙;马趣环;叶礼巧;邓毅;顺铂为临床常用的抗肿瘤药物，疗效显著但毒副作用较强。主要表现为肾毒性、肝毒性、耳毒性、心脏毒性、神经毒性及其他毒性等，且尤以肝肾损伤较为严重。甘草作为中药解毒的常用药，具有补脾益气，清热解毒之功。因此本文从化疗药物顺铂对肝肾产生损害的机制及甘草活性成分在防治顺铂引起肝肾损害方面的作用进行概述，旨在为临床甘草与顺铂联合应用增效减毒提供依据。
基于网络药理学及实验验证探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎大鼠作用机制
刘晓萌;刘建平;郎晓猛;焦红;王玉婷;崔泽华;董紫薇;目的:基于网络药理学和实验验证，探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的作用机制。方法:利用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、SWISS TARGETS数据库、基因组注释数据库平台(GENE CARDS)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)筛选香连化浊方和疾病的作用靶点，利用STRING数据库、Cytoscape软件构建蛋白互作网络，筛选核心靶点，利用Metascape数据库进行基因本体论(GO)分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。制备CAG大鼠模型后予香连化浊方干预治疗，观察大鼠胃黏膜组织病理学改变，采用免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)对核心靶点进行验证。结果:网络药理学结果显示香连化浊方中口服利用度较高的成分有珊瑚甙、过氧化苯甲酰内酯、芍药花酮等；主要活性成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等作用于192个靶点，生物学途径主要为参与蛋白磷酸化正调控、氧化应激反应、损伤应答、凋亡信号通路等；细胞组分主要包括膜侧、膜筏、细胞外基质、细胞质的核周围区域等；分子功能包括激酶结合、转录因子结合、蛋白域特异性结合、蛋白激酶活性等。KEGG富集通路与磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞凋亡通路。实验验证研究发现香连化浊方治疗后大鼠胃黏膜萎缩病理程度减轻，胃组织核心靶点AKT1、C-MYC的蛋白表达明显下调(P<0.05),胃组织Cmyc mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:香连化浊方中有效成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等可能通过下调Cmyc mRNA、AKT1、C-MYC蛋白表达抑制胃黏膜细胞过度增殖实现对CAG的治疗作用。
积雪草治疗慢性肾脏病研究进展
唐安琪;蒋廷;陆红梅;吴玲;赵良斌;叶传蕙;李明权;积雪草作为常用中药，具有清热利湿、解毒消肿、活血疗疮之功效，在慢性肾脏病(Chronic kidney disease, CKD)的治疗中疗效确切，不良反应小，具有独特优势。随着现代药理学研究的深入，积雪草治疗CKD具有了丰富的理论基础，展现了更加广阔的应用前景。本文通过检索近几年国内外相关文献，从抑制纤维化、抑制炎症反应、抑制氧化应激、保护足细胞、抑制细胞凋亡五个方面总结了积雪草及积雪草总苷治疗CKD的主要药理机制，为药物开发提供理论依据，为临床实际运用提供参考。
基于数据挖掘的中药雾化吸入治疗下呼吸道感染用药规律分析
武晏屹;叶琳;苗明三;目的:中药雾化吸入疗法在呼吸系统疾病的治疗应用广泛,尤其在下呼吸道疾病中具有独特优势,能迅速缓解临床症状、促进排痰。本文基于数据挖掘分析中药雾化吸入治疗下呼吸道疾病用药规律,为中药雾化吸入疗法的临床应用及新冠肺炎的防治提供参考。方法:检索1965年12月至2020年03月之间CNKI中以中药吸入治疗下呼吸道疾病的临床研究文献,总结单味药应用情况、中药的性味归经、中药药效分类,逐一输入Excel 2013软件建立数据库。采用Clementine12.0软件及IBM SPSS Statistics 23统计软件进行关联规则分析、因子分析、聚类分析。结果:全部160首方剂中,使用频率最高的前5味中药分别是麻黄、甘草、苦杏仁、黄芩、半夏;从药味分析,以苦、辛类药物为主。从药性来看,以寒性药物为主、温性中药为主。从药物归经分析,以归肺经为主。从药物功效来看,以化痰止咳平喘药为主;关联规则分析得到甘草-半夏-苦杏仁-麻黄等置信度为100%的核心药对,因子分析得到7个公因子;聚类分析将药物分为5类。结论:在雾化吸入疗法的应用中,应辨证论治,遣方用药,重视麻黄、甘草、苦杏仁、黄芩、半夏等的应用;在新冠肺炎的防治中应重视甘草、黄芩的雾化吸入应用,以期在缓解临床症状的同时,提高呼吸道粘膜免疫力;重视药性配伍,避免损伤脾之阳气,以至水湿不运,酿成痰饮内伏。重视甘草-半夏-苦杏仁-麻黄、苦杏仁-紫苏子-麻黄-甘草、苦杏仁-葶苈子-麻黄等核心药对的应用。
探讨糖尿病胃轻瘫大鼠肠道菌群失衡致免疫功能失调的机制研究及半夏泻心汤的干预作用
杨旭;岳仁宋;徐萌;张博荀;陈源;目的:探讨糖尿病胃轻瘫大鼠肠道菌群失衡致免疫功能失调的机制研究及半夏泻心汤的干预作用,为治疗免疫相关性疾病提供一种治疗思路,拓宽半夏泻心汤使用范围及为中药复方免疫调节剂提供实验依据。方法:将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、二甲双胍1.80 g/kg组、半夏泻心汤10.20、5.10、2.55 g/kg组,用16sRNA检测大鼠0.1g粪便中肠道益生菌与致病菌的数量;采用化学法检测血清中D-木糖、IgG、sIgA含量;用ELISA法检测IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α含量;采用免疫组化方法检测CD8表达分布。结果:与正常组相比,模型组大鼠肠推进率显著降低,空腹血糖、胃残留、血清D-木糖水平明显升高;肠道形态结构明显损伤,致病菌明显增多,益生菌明显减少,IgG、IL-6、IL-8、TNF-α、CD8水平明显升高,slgA、IL-10显著降低;与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组均能改善肠道微生态环境,促进益生菌的增殖,减少致病菌水平,调节免疫蛋白IgG、slgA及CD8表达,降低致炎因子,上调抗炎因子水平。结论:糖尿病胃轻瘫可导致高血糖、胃肠动力障碍,引起肠道菌群紊乱,降低肠道菌群多样性,损伤肠黏膜免疫屏障。半夏泻心汤能改善糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠动力障碍,降低血糖,降低肠黏膜通透性;上调抗炎因子水平,促进益生菌生成,抑制有害菌群,减少肠道菌群对肠黏膜屏障损伤,调控肠道黏膜免疫应答。
参芪调肾方通过OPG/RANKL/NF-κB/MMP-9通路抑制慢阻肺炎症介导的骨吸收
周凡超;杨勤军;吴迪;丁焕章;王卉;马啸;吴凡;李泽庚;目的:研究参芪调肾方对香烟烟雾(CS)暴露法建立的慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠的炎症抑制、肺组织病理及骨组织内破骨细胞介导的骨吸收的改善作用机制。方法:将40只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、参芪调肾方8.53、17.06、34.11 g/kg组，每组8只，除正常对照组外，其余4组采用CS暴露法造模24 w,第12 w-24 w各组灌胃给予相应药物或生理盐水，连续12 w; ELISA法检测肺组织、外周血、骨组织内炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；HE染色观察肺组织病理学改变；抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察骨组织内破骨细胞；免疫组化法观察骨组织内骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB p65(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白在小鼠胫骨组织中的定位表达；Western blot法检测肺组织NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9及胫骨OPG、RANKL、NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9、组织蛋白酶K(CTSK)蛋白表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组肺组织损伤明显，管腔内、管壁及周围见大量炎症细胞聚集；肺组织、外周血及骨组织内炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01);骨组织内破骨细胞数量、RANKL、NF-κB p65、MMP-9、CTSK、TRAP蛋白表达显著升高(P<0.01),OPG蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型对照组比较，参芪调肾方各剂量组可不同程度改善小鼠支气管壁增厚、肺气肿形成等病理改变，减轻炎性细胞浸润，参芪调肾方34.11 g/kg组可显著下调肺组织内NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9蛋白表达(P<0.01)、降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.01);明显降低骨组织内破骨细胞数量以及下调RANKL、NF-κB p65、p-NF-κB p65、MMP-9、CTSK、TRAP蛋白表达(P<0.05或P<0.01),显著升高OPG蛋白阳性表达(P<0.01)。结论:参芪调肾方对COPD模型小鼠合并骨质疏松(OP)有一定防治作用，可能是通过调控OPG/RANKL/NF-κB/MMP-9信号通路，改善COPD模型小鼠肺组织病理，降低肺、外周血、骨组织炎症反应，抑制破骨细胞过度活化。